technique cryptosporidie

MISE EN ÉVIDENCE DES CRYPTOSPORIDIES

1 - Coloration de Ziehl-Nielsen modifiée
Réaliser un frottis de muqueuse iléale ou un étalement mince de fèces.
Fixer au méthanol ou éthanol absolu pendant 5 mn.
Sécher à l’air.
Colorer les lames pendant 1 heure dans de la fuchsine phéniquée (10 ml de solution (150 g de
fuchsine dans 1 l d’eau) et 90 ml d’eau phéniquée à 5%).
Rincer à l’eau du robinet.
Différencier dans une solution d’acide sulfurique à 2% pendant 20 secondes en agitant la lame.
Colorer avec une solution de vert de Malachite à 5% pendant 5 mn.
Rincer à l’eau du robinet et sécher à l’air.
Monter sous lamelle et observer au microscope.
Les cryptoporidies apparaissent rondes à ovoïdes, de 4-6 µm, rouge vif sur fond vert. Leur
cytoplasme est granuleux avec un centre souvent plus clair. Tous les autres éléments des fèces
sont colorés en vert. Les autres coccidies sont également rouge vif, mais elles sont beaucoup
plus grosses.

2 - Coloration de Heine
Déposer sur le bord d’une lame 3 µl de matière fécale liquide.
Mélanger avec 3 µl de fuchsine de Ziehl (10 ml de solution (150 g de fuchsine dans 1 l d’eau)
et 90 ml d’eau phéniquée à 5%).
Faire un étalement mince.
Laisser sécher à l’air libre.
Recouvrir rapidement d’huile à immersion.
Mettre une lamelle et observer au microscope. Les oocystes apparaissent très réfringents,
non colorés avec un point sombre au centre, sur un fond rouge. La réfringence ne dure qu’une
quinzaine de minutes.



			MISE EN ÉVIDENCE DES CRYPTOSPORIDIES 1 - Coloration de Ziehl-Nielsen modifiée Réaliser un frottis de muqueuse iléale ou un étalement mince de fèces. Fixer au méthanol ou éthanol absolu pendant 5 mn. Sécher à l’air. Colorer les lames pendant 1 heure dans de la fuchsine phéniquée (10 ml de solution (150 g de fuchsine dans 1 l d’eau) et 90 ml d’eau phéniquée à 5%). Rincer à l’eau du robinet. Différencier dans une solution d’acide sulfurique à 2% pendant 20 secondes en agitant la lame. Colorer avec une solution de vert de Malachite à 5% pendant 5 mn. Rincer à l’eau du robinet et sécher à l’air. Monter sous lamelle et observer au microscope. Les cryptoporidies apparaissent rondes à ovoïdes, de 4-6 µm, rouge vif sur fond vert. Leur cytoplasme est granuleux avec un centre souvent plus clair. Tous les autres éléments des fèces sont colorés en vert. Les autres coccidies sont également rouge vif, mais elles sont beaucoup plus grosses. 2 - Coloration de Heine Déposer sur le bord d’une lame 3 µl de matière fécale liquide. Mélanger avec 3 µl de fuchsine de Ziehl (10 ml de solution (150 g de fuchsine dans 1 l d’eau) et 90 ml d’eau phéniquée à 5%). Faire un étalement mince. Laisser sécher à l’air libre. Recouvrir rapidement d’huile à immersion. Mettre une lamelle et observer au microscope. Les oocystes apparaissent très réfringents, non colorés avec un point sombre au centre, sur un fond rouge. La réfringence ne dure qu’une quinzaine de minutes.








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			3 - Technique de flottation d’Anderson Mélanger 1 à 5 g de fèces dans 10 à 15 ml d’eau et agiter. Filtrer à travers 6 épaisseurs de gaze. Centrifuger le filtrat 10 mn à 500 g. Reprendre le culot dans 10 ml de solution saturée en saccharose (d=1,27). Centrifuger 10 mn à 500 g. Prélever du liquide sur la surface du ménisque et le déposer entre lame et lamelle. Observer au microscope. Les oocystes apparaissent juste en dessous de la lamelle, légèrement colorés intrinsèquement du rose au bleu-gris. Au bout d’une heure environ, les oocystes sont détruits.


			4 - Coloration par la méthode de Giemsa Réaliser un frottis de muqueuse iléale ou un étalement mince de fèces. Fixer au méthanol ou éthanol absolu pendant 5 mn. Sécher à l’air. Colorer pendant 10 mn dans du Giemsa rapide dilué au 1/20. Rincer à l’eau du robinet. Sécher à l’air. Observer au microscope. Les cryptosporidies apparaissent avec un cytoplasme bleuté granuleux et un centre généralement plus clair et contenant des corpuscules rouge foncé. Elles sont souvent entourées d’un halo clair.